【產(chǎn)品簡介】

酪酰胺信號放大（TSA）系統(tǒng)可用于檢測熒光免疫細胞化學（ICC）、免疫組織化學（IHC）   中的低豐度靶點，可將信號靈敏度提高100倍。TSA 熒光試劑盒使用辣根過氧化物酶（HRP）直接催化固定化酶周圍的熒光基團共價沉積，形成永久性共價鍵結(jié)合。在運用HRP二抗及一抗在室溫下由抗體洗脫液脫離掉抗原失活的原理，重復此過程，即可實現(xiàn)同種屬熒光雙標及熒光三標以及多標（注：此過程僅適用于冰凍切片、細胞爬片的熒光多標）。

此試劑盒中的熒光探針可單獨或配合使用?？梢詫崿F(xiàn)單標、雙標、三標、四標、五標、六標或熒光放大等功能不受一抗種屬的影響，極大豐富了熒光多色的內(nèi)容。

【儲存與運輸】

冰袋（wet ice）運輸；-20℃長期保存,短期于4℃保存，有效期 12 個月。

【使用方法】

細胞爬片

1.固定通透

在培養(yǎng)板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min，用4%多聚甲醛固定15min，PBS浸洗3此，每次3min。細胞通透劑（貨號：HKI0048）室溫通透20min（細胞膜上表達的抗原可省略）。

2.封閉處理

PBS浸洗3次，每次3min，吸水紙吸干PBS，滴入封閉液（貨號：HKW2085/86/87/99）完全覆蓋細

胞，室溫封閉30min。

3.一抗孵育

棄掉封閉液，滴加用通用抗體稀釋液（貨號：HKW2083）適當比例稀釋的一抗并放入濕盒，4℃孵育過夜（或37℃濕盒孵育2h）。

4.二抗孵育

PBST浸洗3次，每次3敏，吸干多余液體滴加稀釋好的與一抗相應(yīng)種屬的HRP標記二抗，濕盒中37℃孵育1h，PBST浸洗3次，每次3min。

5.加TSA 信號放大試劑

根據(jù)需要標記的熒光顏色加對應(yīng)的TSA 信號放大試劑，孵育3-10min可具體根據(jù)預實驗條件。如遇標記效果差的可添加熒光增強劑進一步加強，增強劑:熒光試劑1:500正常孵育，濃度也可摸索使用。

6. 熒光多色實現(xiàn)

抗體洗脫液37℃預熱至完全溶解，滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋細胞，37℃放置8分鐘，棄去洗脫液，再次滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋細胞，37℃放置8分鐘，棄洗脫液，PBS浸洗3次，每次5min，洗脫掉一抗及相應(yīng)二抗，再重復步驟3-5，實現(xiàn)熒光多色。

7.DAPI復染細胞核

8.抗熒光淬滅封片劑封片

9.相應(yīng)熒光通道拍照或掃描

冰凍切片

1. 復溫固定

冰凍切片室溫防置30min后，入純甲醇固定10min。（亦可采用其他固定方式）

2.阻斷內(nèi)源性過氧化物酶和血清封閉

PBS浸洗切片3次，每次5min，用過氧化物酶阻斷劑（貨號：HKI0047）孵育25min，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，滴入封閉液（貨號：HKW2085/86/87/99）37℃孵育20min。

3.一抗孵育

棄掉封閉液，滴加適當比例稀釋的一抗并放入濕盒，4℃孵育過夜。

4.二抗孵育

PBST浸洗3次，每次3敏，吸干多余液體滴加稀釋好的與一抗相應(yīng)種屬的HRP標記二抗，濕盒中37℃孵育1h，PBST浸洗3次，每次3min。

5.加TSA 信號放大試劑

根據(jù)需要標記的熒光顏色加對應(yīng)的TSA 放大試劑，孵育3-10min可具體根據(jù)預實驗條件。如遇標記效果差的可添加熒光增強劑進一步加強，增強劑:熒光試劑1:500正常孵育，濃度也可摸索使用。

   6.熒光多色實現(xiàn)

抗體洗脫液37℃預熱至完全溶解，滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋組織，37℃放置8分鐘，棄去洗脫液，再次滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋細胞，37℃放置8分鐘，棄洗脫液，PBS浸洗3次，每次5min，洗脫掉一抗及相應(yīng)二抗，再重復步驟3-5，實現(xiàn)熒光多色。

7.DAPI復染細胞核

8.抗熒光淬滅封片劑封片

9.相應(yīng)熒光通道拍照或掃描

【注意事項】

1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
3. POLY-HRP羊抗兔二抗屬于附贈試劑，不足100T劑量，可根據(jù)需要回購。