杭州浩克生物一、實(shí)驗(yàn)器材及試劑
1、實(shí)驗(yàn)器材
| 名稱 | 廠家 | 型號(hào) |
| 脫水機(jī) | 武漢俊杰電子有限公司 | JJ-12J |
| 包埋機(jī) | 武漢俊杰電子有限公司 | JB-P5 |
| 病理切片機(jī) | 上海徠卡儀器有限公司 | RM2016 |
| 凍臺(tái) | 武漢俊杰電子有限公司 | JB-L5 |
| 組織攤片機(jī) | 浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司 | KD-P |
| 烤箱 | 上海福瑪實(shí)驗(yàn)儀器有限公司 | DGX-9003B |
| 載玻片及蓋玻片 | 江蘇世泰實(shí)驗(yàn)器材有限公司 | 10212432C |
| 水浴鍋 | 天力醫(yī)療器械有限公司 | TL-420D |
| 脫色搖床 | 北京市六一儀器廠 | WD-9405A |
| 渦旋混合器 | 天悅電子 | TYXH-II |
| 移液槍 | Dragon | KE0003087/KA0056573 |
| 組化筆 | Gene tech | GT1001 |
| 倒置熒光顯微鏡 | 日本尼康 | Nikon Eclipse Ti-SR |
| 成像系統(tǒng) | 日本尼康 | Nikon DS-U3 |
2、主要實(shí)驗(yàn)試劑
| 試劑 | 廠家 | 貨號(hào) |
| 無水乙醇、二甲苯 | 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 | |
| PBS緩沖液 | 谷歌生物 | G0002 |
| 蛋白酶K | Roche | |
| 破膜液 | 谷歌生物 | G1204 |
| DAPI | 谷歌生物 | G1012 |
| 抗熒光淬滅封片劑 | 谷歌生物 | G1401 |
| 鹽酸、氨水、雙氧水 | 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 | |
| Tunel試劑盒 | Roche | 11684817910 |
二、石蠟切片tunel實(shí)驗(yàn)步驟
1、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。
2、修復(fù)：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止液體流走)，在圈內(nèi)滴加蛋白酶K工作液覆蓋組織，37度溫箱孵育30min。將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
3、破膜：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加破膜工作液覆蓋組織，常溫下孵育20min，將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
4、加試劑1,2：按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑1(TdT)和試劑2(dUTP)按2:29混合，加到圈內(nèi)覆蓋組織，切片平放于濕盒內(nèi)，37℃水浴鍋孵育2小時(shí)，濕盒內(nèi)加少量水保持濕度。
5、DAPI復(fù)染細(xì)胞核：切片用PBS(PH7.4)洗滌3次，每次5min。去除PBS后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。
6、封片：玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
7、 鏡檢拍照：切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。
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