杭州浩克生物一、實(shí)驗(yàn)器材及試劑
1、實(shí)驗(yàn)器材
| 名稱 | 廠家 | 型號(hào) |
| 脫水機(jī) | 武漢俊杰電子有限公司 | JJ-12J |
| 包埋機(jī) | 武漢俊杰電子有限公司 | JB-P5 |
| 病理切片機(jī) | 上海徠卡儀器有限公司 | RM2016 |
| 凍臺(tái) | 武漢俊杰電子有限公司 | JB-L5 |
| 組織攤片機(jī) | 浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司 | KD-P |
| 烤箱 | 天津市萊玻瑞儀器設(shè)備有限公司 | GFL-230 |
| 載玻片 | haokebio | |
| 正置光學(xué)顯微鏡 | 日本尼康 | Nikon Eclipse E100 |
| 成像系統(tǒng) | 日本尼康 | Nikon DS-U3 |
2、主要實(shí)驗(yàn)試劑
| 試劑名稱 | 廠家 | 貨號(hào) |
| 無水乙醇 | 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 | 100092683 |
| 鹽酸 | 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 | |
| 冰醋酸 | 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 | |
| 改良苯酚品紅染液 | haokebio | |
| 甘油明膠封片劑 | haokebio | G1402 |
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1、取材：查閱相關(guān)植物對(duì)應(yīng)的根尖分裂旺盛期，在此期間剪取新生根尖約2-3cm，純水稍洗凈。
2、預(yù)處理：用秋水仙素或者8-羥基喹啉預(yù)處理或者置于純水中4℃處理約24h(選做)。
3、固定：取出根尖置于卡諾氏固定液(無水乙醇：冰醋酸=3:1混勻)中4℃固定約1-4h，轉(zhuǎn)移根尖至75%的乙醇中保存;
4、低滲：取出根尖純水稍洗2遍，置于純水中浸泡約30min;
5、解離：取出根尖置于1M HCL溶液中60℃處理10-30min，純水洗2遍，置于純水中浸泡約30min;
6、取材染色：將根尖用純水清洗2遍后置于載玻片上，切取根尖分生區(qū)并撥散，組畫筆畫圈，晾干或者稍烤干分生區(qū)組織細(xì)胞，滴加改良苯酚品紅染液染色15-35min;
7、壓片：直接用染色液封片，稍吸除多余的染色液，蓋玻片上覆蓋濾紙，用橡皮擦或者手指平整地按壓玻片進(jìn)行壓片，分散染色體;
8、封片：將制好的玻片放置-20℃下冰凍約10min，取出后用刀片從蓋玻片一角迅速撬開，晾干或烤干載玻片和蓋玻片，甘油明膠或中性樹膠封片。
9、顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。
三、結(jié)果判讀：
染色體呈深的紫紅色，背景淺的紫紅色或者無色。
四、注意事項(xiàng)：
1、若固定后的根尖暫時(shí)不使用，保存在75%的乙醇中，下次使用前需要再次固定，4℃條件下約4h。
2、壓片過程中，防止蓋玻片移動(dòng)或者破裂，得到數(shù)量清晰的染色體，此步驟操作較難成功。
3、改良苯酚品紅染色液陰涼通風(fēng)處可保存1年不變質(zhì)。
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