免疫組化 分子病理 實(shí)驗(yàn)服務(wù) 免疫組化雙染（芯片）免疫組化 分子病理 實(shí)驗(yàn)服務(wù) 價(jià)格￥300單位張貨號(hào)HKF2026品牌浩克 QQ53383090 咨詢購買 產(chǎn)品介紹產(chǎn)品參數(shù)資料下載 【產(chǎn)品信息】 產(chǎn)品名稱產(chǎn)品貨號(hào)規(guī)格價(jià)格免疫組化雙染（芯片）HKF2026張300元實(shí)驗(yàn)原理免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(IHC)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(ICC)。?實(shí)驗(yàn)步驟1.?石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min?-無水乙醇Ⅰ6min-?95%酒精6min- 85%酒精6min，自來水洗2min。2.?抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿抗原修復(fù)液EDTA(9.0)的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)，中火8min至沸騰停火8min再轉(zhuǎn)中低火7min，此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。3.?阻斷內(nèi)源性過氧化物酶：切片加上3%的雙氧水，室溫孵育25min，將玻片置PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。4.?畫圈：用組化專用的組化筆沿著組織外圍輪廓畫一個(gè)與組織間隔3-4毫米的小圈，然后加入足量的PBS保證后續(xù)依次加入的封閉血清，一抗，二抗，以及顯色劑能完全覆蓋組織，而不沿著玻片流走。5.?血清封閉:在組化圈內(nèi)滴加3%BSA?均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。6.?加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒4°過夜孵育。7.?加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與超敏兔鼠通用二抗（HRP標(biāo)記）覆蓋組織，室溫孵育50min。8.?顯色：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加解凍的TY反應(yīng)液反應(yīng)20min，然后PBS洗三次，之后加入紅色顯色液工作液（PB:CU:紅色色原：AC=860:40:1:100），顯微鏡下控制顯色時(shí)間，陽性為紅色，純水沖洗切片終止顯色。(時(shí)間較長15min左右)，再重復(fù)2-7的操作步驟。9.?抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿抗原修復(fù)液EDTA(9.0)的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)，中火8min至沸騰停火8min再轉(zhuǎn)中低火7min，此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。10.?阻斷內(nèi)源性過氧化物酶：切片加上3%的雙氧水，室溫孵育25min，將玻片置PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。11.?畫圈：用組化專用的組化筆沿著組織外圍輪廓畫一個(gè)與組織間隔3-4毫米的小圈，然后加入足量的PBS保證后續(xù)依次加入的封閉血清，一抗，二抗，以及顯色劑能完全覆蓋組織，而不沿著玻片流走。12.?血清封閉:在組化圈內(nèi)滴加3%BSA?均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。13.?加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒4°過夜孵育。14.?加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與超敏兔鼠通用二抗（HRP標(biāo)記）覆蓋組織，室溫孵育50min。15.?DAB顯色：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加（稀釋液和濃縮液1000:50配制）新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下控制顯色時(shí)間，陽性為棕黃色，純水沖洗切片終止顯色。16.?復(fù)染細(xì)胞核：蘇木素染色2-3mins左右，自來水洗，蘇木素分化液分化2秒，自來水沖洗，蘇木素返藍(lán)液返藍(lán)15-30s，流水沖洗。17.?脫水封片：將切片依次放入75%酒精5min-85%酒精5min -95%酒精5min -無水乙醇5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min 中脫水透明，將切片從二甲苯拿出來稍晾干，中性樹膠封片。18.?顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。結(jié)果判讀：蘇木素染出細(xì)胞核為藍(lán)色，DAB顯出的陽性表達(dá)為棕黃色，紅色顯色試劑呈粉紅色注意事項(xiàng)：1．注意切片脫蠟是否徹底；2．實(shí)驗(yàn)過程中切片勿干片；3. ? 實(shí)驗(yàn)操作中小心槍頭掛傷組織。 無 暫無 說明文檔下載說明書.pdf 上一篇: IF+TUNEL雙染下一篇: IHC+普魯士藍(lán)（或其他化學(xué)染料） 推薦 免疫熒光（五標(biāo)） 2023年7月5日 1060 【產(chǎn)品信息】 無 暫無 查看全文 大體油紅O染色 2024年9月11日 2202 【產(chǎn)品信息】 油紅O染料在脂質(zhì)中的溶解度大于在有機(jī)溶劑的溶解度，所以染色時(shí)染料便從染液中轉(zhuǎn)移到被染的脂質(zhì)中去，使脂質(zhì)呈現(xiàn)出紅色。常用于鑒別... 查看全文 PAS+萘酚黃S 2023年7月6日 2858 【產(chǎn)品信息】 無 暫無 查看全文 細(xì)胞爬片 2024年9月9日 3086 服務(wù)介紹： 無 暫無 查看全文
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