【產(chǎn)品信息】

【產(chǎn)品簡介】

miRNA雜交試劑盒包含捕獲探針、預(yù)放大探針和擴(kuò)增探針。捕獲探針與靶序列結(jié)合，洗去未結(jié)合的捕獲探針，預(yù)放大探針與捕獲探針結(jié)合。預(yù)放大探針上有多段重復(fù)序列，可觸發(fā)分支狀HCR反應(yīng)（雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)），形成大分子核酸聚集體。每條核酸鏈均標(biāo)記有地高辛（DIG），通過抗體識(shí)別實(shí)現(xiàn)顯色檢測。

【組織固定】

【儲(chǔ)存與運(yùn)輸】

冰袋（wet ice）運(yùn)輸；-20℃長期保存,短期于4℃保存，有效期6個(gè)月。

【使用方法】

1. 脫蠟至水

依次將切片放入二甲苯Ⅰ15 min-二甲苯Ⅱ15 min-二甲苯Ⅲ15 min-無水乙醇10 min-90%酒精10 min-80%酒精10 min -70%酒精10 min -純水沖洗。

2. 修復(fù)

細(xì)胞樣本：等待切片完全干燥后，用組畫筆（推薦HKR14P原位雜交專用組畫筆）畫出大小合適的疏水圈，在原位雜交儀中或濕盒中水平放置切片。將100ul蛋白酶K修復(fù)液(1X)滴于組織上，37℃孵育10min，純水沖洗終止反應(yīng)。

冰凍切片：細(xì)胞樣本：等待切片完全干燥后，用組畫筆（推薦HKR14P原位雜交專用組畫筆）畫出大小合適的疏水圈，在原位雜交儀中或濕盒中水平放置切片。將100ul蛋白酶K修復(fù)液(1X)滴于組織上，37℃孵育20min（冰凍切片），純水沖洗終止反應(yīng)。

石蠟切片：將裝入玻片的玻片架放入修復(fù)槽，倒入1x檸檬酸6.0修復(fù)液（樣本區(qū)域須被浸沒），蓋上蓋子，用膠帶紙封住，放入微波爐中，中火8min，停8min，中低火8min。自然冷卻降溫后，用3%雙氧水封閉15min。

3. 封閉

甩干切片上的液體，每張切片滴加100ul封閉液，37℃孵育30min，洗滌1次，每次5min。洗滌步驟：將裝入玻片的玻片架放入洗液缸，倒入洗液（樣本區(qū)域須被浸沒），置于搖床上5min，轉(zhuǎn)速為60。

4. 探針雜交

甩干切片上的液體，每張切片滴加100ul的探針，37℃孵育3h或過夜，注意保持濕度以防干片。洗滌5次，每次5min。洗滌步驟：將裝入玻片的玻片架放入洗液缸，倒入洗液（樣本區(qū)域須被浸沒），置于搖床上5min，轉(zhuǎn)速為60。

5. 預(yù)放大雜交

甩干切片上的液體，每張切片滴加100ul的預(yù)放大探針，37℃孵育3h或過夜，注意保持濕度以防干片。洗滌5次，每次5min。洗滌步驟：將裝入玻片的玻片架放入洗液缸，倒入洗液（樣本區(qū)域須被浸沒），置于搖床上5min，轉(zhuǎn)速為60。

6. 探針放大

甩干切片上的液體，每張切片滴加100ul的放大探針，37℃孵育1.5h，注意保持濕度以防干片。洗滌5次，每次5min。洗滌步驟：將裝入玻片的玻片架放入洗液缸，倒入洗液（樣本區(qū)域須被浸沒），置于搖床上5min，轉(zhuǎn)速為60。

7. HRP-鼠抗地高辛

甩干切片上的液體，每張切片滴加100ul的HRP-鼠抗地高辛（1x），37℃濕盒孵育40min；洗滌5次，每次5min。洗滌步驟：將裝入玻片的玻片架放入洗液缸，倒入洗液（樣本區(qū)域須被浸沒），置于搖床上5min，轉(zhuǎn)速為60。

8. 顯色

甩干切片上的液體，每張切片滴加100ul的TSA顯色液，室溫孵育10min。純水沖洗，終止反應(yīng)。

9. DAPI染核

每張切片滴加50ul DAPI染液，避光孵育5min，純水沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。

【注意事項(xiàng)】

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅作科研用途。

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