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  簡介:熒光定量PCR是通過熒光染料(SYBR Green)或熒光標記的特異性的探針,對PCR產物進行標記跟蹤,實時在線監(jiān)控反應過程,結合相應的軟件可以對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。可以用于檢測mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA的基因表達水平。最終所得的PCR產物可以通過瓊脂糖凝膠電泳進一步驗證引物特異性。

  實驗流程:

  1.接收樣本

  2.組織勻漿、細胞和血液樣本吹打裂解-RNA提取-RNA濃度測定—逆轉錄成cdna—熒光定量PCR-(PCR產物電泳)-數(shù)據(jù)分析

  其中mRNA為普通逆轉錄,lncRNA可選采取普通和特異性逆轉錄,circRNA和miRNA采取特異性逆轉錄

  3.交付結果:完整項目報告(擴增曲線、數(shù)據(jù)分析、引物信息、實驗報告)

  實驗周期:60個循環(huán)內,7個工作日內出結果

  樣品要求:

  1、組織: 100mg(黃豆大小),最少50mg(綠豆大小),脂肪組織,結締組織,纖維化組織適當增加。

  2、細胞:1×10^6個細胞,貼壁細胞舒展,未變圓;

  3、全血:2mL,最少1mL新鮮血液EDTA抗凝管;

  4、血清:2mL,干冰運輸;

  5、植物:葉、果肉、種子等需100mg,最少50mg。

  6、RNA樣品:純度OD260/280 比值為1.8-2.0,濃度≥500ng/ul,體積≥20ul。

  7、cdna:cdna原液20uL。

  樣本運輸:可選擇以下任何一種方式寄送標本

  1.動植物組織樣本、細胞樣本、血清、RNA、cDNA以干冰運輸;

  2.細胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染、灌滿培養(yǎng)液不漏出),常溫運輸;

  3.全血樣本是EDTA抗凝管4度運輸。

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