杭州浩克生物熒光原位雜交（FISH、IF 雙染）
| Tunel（白光）檢測 | 200元/張 |
| Tunel（熒光）檢測 | 200元/張 |
| IF Tunel 雙染 | 250元/張 |
| Tunel( 芯片） | 550元/張 |
| 原位雜交（DAB 顯色） | 240元/張 |
| 原位雜交（FISH 單標） | 240元/張 |
| 原位雜交（FISH、IF 雙染） | 300元/張 |
| 原位雜交（FISH 雙標） | 300元/張 |
| 原位雜交（FISH 三標） | 350元/張 |
| 原位雜交（芯片） | 500元/張 |
| 探針設(shè)計合成（一端標記、BIO） | 600元/張 |
| 探針設(shè)計合成（一端標記、DIG） | 1000元/張 |
| 探針設(shè)計合成（一端標記、FAM） | 1100元/張 |
| 探針設(shè)計合成（一端標記、Cy3） | 1900元/張 |
| 探針設(shè)計合成（兩端標記、BIO） | 1200元/張 |
| 探針設(shè)計合成（兩端標記、DIG） | 1960元/張 |
| 探針設(shè)計合成（兩端標記、FAM） | 1400元/張 |
| 探針設(shè)計合成（兩端標記、Cy3） | 2500元/張 |
原位雜交與免疫熒光原理：原位雜交是指將特定標記的已知順序核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交，從而對特定核酸順序進行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。免疫熒光就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體或抗原上，與其相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。
應(yīng)用
通過原位雜交及免疫熒光雙染，可以在組織細胞中對核酸分子和蛋白指標同時進行共定位、以及定性分析，可以用來從共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。
實驗流程
石蠟切片熒光探針原位雜交與免疫熒光雙標實驗步驟
1. 組織固定、脫水、切片、石蠟切片脫蠟至水;
2. 消化：切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘，滴加蛋白酶K消化;
3. 預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液，37°C孵育1h。
4. 雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針 雜交液濃度 ，恒溫箱 度雜交過夜。
5. 雜交后洗滌：SSC洗滌;
6. 孵育一抗、二抗：滴加一抗，4℃過夜，后PBS洗3×5min;滴加相應(yīng)二抗，室溫孵育50min，PBS洗3×5min;
7. DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min;
8. 鏡檢拍照;
樣品保存運輸
組織冰凍切片
組織切取需要部位，厚度在2mm 左右, PBS漂洗，干冰運輸或立即置于固定液中。組織固定有原位雜交固定液
(動物)、原位雜交固定液(植物)、原位雜交固定液(較嫩植物)，室溫固定12小時(根據(jù)組織大小)以上，植物組織固定時需常溫抽真空30min，再用純水或PBS清洗兩次后， 放入15%蔗糖溶液中，4℃脫水8小后，換30%蔗糖溶液4℃過夜。冰切時佩戴手套。冰凍切片放-20℃或-80℃保存?zhèn)溆谩?br> 組織石蠟切片
組織切取需要部位，厚度在2mm 左右, PBS漂洗后立即固定。動物組織用原位雜交固定液(動物)，植物組織用原位雜交固定液(植物)或原位雜交固定液(較嫩植物)，植物組織固定時需常溫抽真空30min，固定12h以上。固定完成后脫水、包埋、切片。梯度酒精配制需用DEPC水。石蠟常規(guī)保存?zhèn)溆谩?br> 標本運輸
冰凍切片：標本放原位雜交固定液中，常溫運輸;冰凍切片-20℃運輸;新鮮組織干冰運輸。交接單隨樣本一起，單獨封裝。
石蠟切片：標本放原位雜交固定液中，常溫運輸;石蠟切片常溫運輸。交接單隨樣本一起，單獨封裝。
細胞爬片：細胞爬片加原位雜交固定液后密封4℃運輸。交接單隨樣本一起，單獨封裝。
實驗注意事項：
1. mRNA為檢測對象時，需嚴格要求實驗環(huán)境經(jīng)無RNA酶處理;
2. FISH切片保存時間較短，應(yīng)盡快取圖;
3. 不同的抗體與原位雜交進行雙標時，可能會有影響，必要時進行一定的實驗步驟調(diào)整，以避免相互之間的影響;
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